轉譯醫學研究法探討茶緩解菸害之機轉:乳癌和動脈粥狀硬化為例(3/3)

計畫主持人的研究證實國人乳癌組織9-型尼古丁受體 (9-nicotinic acetylcholine receptor)表現量較正常乳房組織高達 8倍 (Journal of the National Cancer Institute 2010; 102 ( 17 ): 1322–1335)。該雜誌編輯 Professor R. Ilona Linnoila並撰寫特別評論，說明尼 古丁結合至該受體之致癌作用與臨床重要性(JNCI102(17):1298-1299, 2010)。因此，計畫 主持人倡導以9-型尼古丁受體作為預防菸害之分子標的 (Clinical Cancer Research 17:3533-3541, 2011; review article)。本計畫期望利用國人常飲用之茶成分，透過臨床試 驗轉譯研究，探討茶成分抑制9-型尼古丁受體作為預防菸害的分子機制探討，本計畫 選擇國人好發之乳癌與心血管疾病作為研究疾病標的，計劃書內容亦將呈現部份成果， 盼能藉此獲得貴委員認同與支持。本計畫預計時程為三年，預計完成目標如下: 1. 製備 GMP等級之臨床試驗用茶膠囊與國人常飲用茶成分分析: 1-1 國人常飲用茶成分分析:如烏龍，包種，茉莉，紅茶，普洱，綠茶等。 1-2 製備茶萃取物: 進行緩解或拮抗尼古丁菸害之細胞與動物實驗。 1-3 製備 GMP等級茶膠囊:滅菌與 PTP包裝，並完成乳癌受試者臨床試驗。 2. 乳癌病人與正常受試者臨床試驗: 2-1 受試者分類、檢體採集、血液、生化、尿液常規分析。 2-2 建立白血球細胞庫:利用 real-timePCR分析喫茶前、中、後尼古丁受體表現。 2-3 miRNA晶片檢測:以乳癌病人開刀前、後血清樣本，分析早發性、三陰性、抽菸者、 血中特異型 miRNA 變化情形。本計畫已完成十例先期結果，採用下列晶片， TaqMan®MicroRNA Assay HAS-MIR-15A, Applied Biosystem Co.。 2-4 開發診斷晶片:指標性 miRNA作為預測特定型態(如早發性)乳癌分子標誌。 2-5 利用乳癌病人血中指標性 miRNA分子標誌，評估茶膠囊之臨床試驗結果。 3. 細胞模式探討茶成分抑制動脈粥狀硬化與乳癌形成形成之分子機制: 3-1 免疫染色:流式細胞儀分析喫茶前、中、後尼古丁受體於白血球細胞分布。 3-2 建立受試者單核球細胞庫:以磁珠單株抗體進行純化，建立初代培養細胞。 3-3 建立模擬尼古丁暴露之細胞平台:茶萃取成分抑制作用之細胞學評估。 3-4 動脈粥狀硬化形成之細胞模式:泡沫狀(foam)細胞誘導實驗、單核球細胞 LDL 受體 活化試驗、單核球細胞與血管內皮細胞之交互作用、巨噬細胞穿越血管內皮細胞 形成細胞斑塊試驗等等，以評估茶萃取成分抑制菸害作用。 3-5 乳癌致癌作用之細胞模式:人類血管內皮細胞血管新生作用、乳癌細胞移行、侵襲作 用、乳癌細胞尼古丁受體與其他表面受體之交互作用(FRET和 FLIM) 3-6 茶膠囊試驗指標性 miRNA之探討:乳癌與粥狀硬化相關基因表現之調控。 4. 動物模式探討茶成分抑制動脈粥狀硬化與乳癌形成形成之分子機制: 4-1 茶萃取成分抑制尼古丁引起之血管粥狀硬化動物模式: 4-2 茶萃取成分抑制尼古丁引起之腫瘤血管新生作用: 4-3 茶萃取成分抑制尼古丁所引起之腫瘤轉移動物模式: 4-4 乳癌病人個人化醫療快速篩藥分子報導模式動物建立: 評估茶成分抑制尼古丁所誘 發腫瘤之治療成效 5. 研究時程構想圖: