研究miR-203及miR-34a在EGFR活化的攝護腺癌轉移中之調控機制

在攝護腺癌變過程中，Ras基因先天或後天的突變是增加癌症轉移的重要路徑。MicroRNA (miRs)調控胚胎的發育以及影響攝護腺癌變的過程。在臨床檢體中發現攝護腺癌病人的miR-203與miR-34a表現比正常人少。但目前還不清楚在攝護腺癌轉移過程中，miR-203與miR-34a是如何與EGFR訊號傳遞路徑基因的作用機制。了解miR-203與miR-34a是如何調控與EGFR訊號傳遞的相關基因，將有助於了解在攝護腺癌變過程中miRNA所扮演的重要腳色。為了研究miRNA是如何調控與EGFR訊號傳遞路徑有關的攝護腺癌，我們已發現在增加miR-203與miR-34a的表現之後，具RasV12G35突變的人類攝護腺癌細胞株DU145，降低了老鼠模式癌轉移的情況，在體外也發現miR-203與miR-34a抑制與EGFR訊號傳遞相關基因的表現。在攝護腺病人臨床資料庫分析中，發現降低的miR-203/miR-34a與增加的AREG、EREG、TGFA有相互關聯。為了解miR-203與miR-34a如何調控EGFR訊號傳遞路徑，我們假設在活化的EGFR訊號傳遞路徑過程中，miR-203與miR-34a表達程度的減少為攝護腺癌轉移所必須。我們的研究計畫將會證明在攝護腺癌轉移過程中，miR-203與miR-34a是如何調解AREG、EREG、TGFA基因的表現。已構建好含有miR-203與miR-34a homology sites 的3’UTR reporter將會用來測試miRNA對其調控的能力。另外我們發現外加EGF後，造成miR-203與miR-34a的表現降低，並提高SNAIL及polycomb repressive complexes (PRCs)的表現。為了解SNAIL及PRCs如何調控miR-203與miR-34a的表現，在primary mir-203 和 mir-34a 的stem-loop promoter上定位E box，並在細胞活化EGFR之後，利用reporter及ChIP assay來測量 SNAIL/PRCs調控miR-203與miR-34a的功能及結合能力，如此將有助於了解 miR-203與miR-34a如何參與調控EGFR訊號傳遞相關之攝護腺癌轉移。另外我們也將進一步瞭解SNAIL/PRCs如何餐與在primary mir-203 及 mir-34a 的stem-loop promoter上CpG islands的甲基化。過去在non-small-cell lung cancer (NSCLC)模式中，已清楚Ras基因突變會造成tyrosine kinase inhibitors (TKIs)的抗藥性。但目前還不清楚這一類的藥物在攝護腺癌的分子機轉。為進一步研究miR-203與miR-34a如何影響具TKIs抗藥性的攝護腺癌細胞之apoptosis，我們的初步結果發現當過度表現miR-203與miR-34a於具RasV12G37突變的攝護腺癌細胞，會造成較多的細胞凋亡。我們假設增加miR-203與miR-34a在具RasV12G37突變的攝護腺癌細胞中會增加TKIs抗藥性的敏感性，是由於miR-203與miR-34a藉由調控AREG, EREG, and TGFA基因之表現，進而抑制EGFR訊號傳遞路徑。另外，我們假設在具RasV12G37突變的TKIs抗藥性攝護腺癌中， SNAIL/PRCs為造成miR-203及miR-34a表達程度的減少及增加TKIs抗藥性所必須。我們的研究計畫將會證明在攝護腺癌轉移過程中，miR-203及miR-34a是如何調解EGFR訊號傳遞的作用機轉，以及了解減少的miR-203及miR-34a與活化的EGFR訊號路徑在攝護腺癌轉移與TKIs抗藥性之間的關係。