大豆蛋白對酒精性肝臟疾病影響機制之探討

酒精性肝臟疾病 (alcoholic liver disease, ALD) 是由於長時間大量飲酒所造成的。酒精的代謝會產生許多自由基，造成氧化壓力上升，並使體內脂質代謝失去平衡，導致肝臟脂質堆積；另外，也會破壞腸道障壁完整性，使腸道通透性而引起發炎反應，進一步促進肝臟組織的損傷。許多研究發現，大豆蛋白在調節脂質代謝、降低氧化壓力和發炎反應及促進腸道健康方面可能具有正面的影響。因此，本研究的第一階段擬以初代肝細胞培養模式，探討在添加酒精的條件下，不同型式之大豆異黃酮素genistein和daidzein是否會影響肝臟細胞中peroxisome proliferator activated receptor-α (PPAR-α) 和cytochrome P450 2E1蛋白質的表現。在添加酒精和異黃酮素後9, 12, 24及48小時收集細胞，計算細胞存活率、測量CYP 2E1和PPAR-α 蛋白質表現量、TNF-α 濃度，並測定細胞抗氧化酵素活性與三酸甘油酯的含量，以比較不同型式之大豆異黃酮素是否能藉由調節 CYP2E1 和 PPAR-α 的表現而影響酒精性肝臟疾病。第二階段擬利用動物實驗探討以大豆蛋白取代飲食中的蛋白質，是否具有改善肝臟脂質堆積和肝臟損傷的作用。以長期在飲水中添加酒精的方式誘發大鼠酒精性肝臟疾病，在30週的實驗期間，實驗動物分別餵食以AIN-93M為基礎的實驗飲食：C組(控制組)、N組(飲水含20 %酒精)、E組(大豆蛋白飲食、飲水含20%酒精)。實驗末分析實驗動物血液和肝臟中脂質、抗氧化酵素及細胞激素的含量；此外，分析肝臟中CYP 2E1和PPAR-α 蛋白質表現量，並以病理切片觀察肝臟脂肪堆積和發炎的情形。第三階段將利用藥物(Non-Steroidal Anti-Inflammatory Drugs)誘發腸道通透性增加的模式，探討大豆蛋白是否可改善因腸道通透性增加所造成的組織損傷和發炎反應增加的情形。實驗動物分別餵食AIN-93M或以大豆蛋白取代酪蛋白的飲食，在第二週時由腹腔施打indomethacin，在第0、2、3、4週分析腸道通透性，並犧牲部分實驗動物，分析實驗動物血液、肝臟及小腸細胞激素濃度，並以病理切片觀察肝臟發炎和小腸受損情形。