重組OmpA蛋白片段保護小鼠避免因大腸桿菌血流感染造成死亡之研究

在過去的幾十年中，新生兒腦膜炎雖然死亡率已經下降，但仍是一個嚴重與高發病率的疾病。此外， 倖存者中約40％會表現出神經性的後遺症。大腸桿菌是引起新生兒腦膜炎主要的革蘭氏陰性細菌。大 腸桿菌外膜蛋白A（OmpA）的N 端-barrel 結構域包含有4 個表面暴露親水性環路，是有效的OmpA 構型和功能所必需的。我們以重組蛋白的技術表現大腸桿菌OmpA 的N 端結構域的不同片段(L1－2， L1－3，L1－4，L2－3，L2－4，and L3－4)，研究這些重組OmpA 的片段是否能夠保護小鼠，避免 於大腸桿菌感染後的死亡。我們已證實並且發表於Journal of Microbiology, Immunology and Infection， L1－3，L2－3，L2－4 片段可以保護小鼠，避免於大腸桿菌感染後的死亡。在這項研究中我們將更進 一步的研究L1－3，L2－3，L2－4 片段保護小鼠避免於大腸桿菌感染後的死亡的分子機轉，並且尋找 具保護作用的更小片段。細菌性腦膜炎，雖然抗生素治療是首選，神經性的後遺症卻無法避免。根據 本研究的結果，我們希望能針對大腸桿菌性腦膜炎建立一個有效的治療應用。本計畫包括（一）首先 在細胞的實驗中，檢查重組OmpA 蛋白片段(L1－3，L2－3，和L2－4)是否藉由抑制大腸桿菌附著進 而侵入C6 細胞，調控GFAP，COX-2 和NOS-2 的表現，同時檢查可能參與的分子機轉。(二) 在小鼠的 實驗中，檢查重組OmpA 蛋白片段(L1－3，L2－3，和L2－4)是否藉由抑制大腸桿菌感染所引起小鼠 腦部COX-2 和NOS-2 的表現，以及白血球的浸潤，保護小鼠避免因大腸桿菌感染所造成的死亡。（三） 以基因重組的技術表現更小的OmpA 蛋白片段(L1，L2，L3，L4)。(四) 檢查新重組的 OmpA 蛋白片 段(L1，L2，L3，L4)是否能保護小鼠避免因大腸桿菌感染所造成的死亡，尋找具保護作用的更小片段； 接著進一步以新重組的OmpA 蛋白片段(L1，L2，L3，L4)進行(一)和(二)的實驗。(五)建立模擬血流 感染上行至中樞神經的感染模式，於小鼠自尾靜脈注射感染大腸桿菌RS218 後，於不同的時間間隔之 後，分別給予個別的具有保護作用的重組OmpA 蛋白片段，檢查是否能保護小鼠避免因大腸桿菌感染 所造成的死亡。