RRM-2抗體藥物之製備與作用機制之研究

Ribonucleotide reductase (RR)是可以把 ribonucleoside diphosphate (NDP)轉化成 DNA複製與細胞增生的 2-deoxyribonucleoside diphosphate (dNDP)的一種酵素。RR 是由 一個大的 RRM1蛋白以及兩個較小的次單位蛋白，包括 RRM2與 RRM2B所組成。RRM1 的表現對初期非小細胞瘤(Non-small cell lung cancer)的病人有較好的癒後情形，而 RRM2B 的表現增加則會明顯地降低大腸直腸癌(colorectal cancer; CRC)細胞侵入的能 力；相反地，抑制 RRM2B 蛋白的表現則會增加細胞爬行的能力。另外，RRM2B 在轉 移的大腸癌組織中的表現量也比原位的組織明顯地減少。這些研究成果都證實 RRM2B 對於腫瘤的生長與轉移有很好的抑制效果。有趣的是，雖然 RRM2與 RRM2B的相似性 高達 80%，不過，RRM2 在 CRC 組織表現量相較於周邊正常的組織則相對增加許多， 顯示這個蛋白可能與腫瘤的發展與轉移有某種程度的相關性。 RR 蛋白的抑制劑已經廣泛地被用來治療很多腫瘤，不過，這些抑制劑的效果因 為抗藥性與副作用而不明顯。既然，組成 RR 的大的 RRM1 與小的 RRM2B都具有抑制 癌症細胞生長、轉移與惡化的作用，那麼 RRM2 則成為發展抗癌藥物的最好目標。因此， 特異性的 anti-RRM2 抗體，可能具有抑制癌症細胞生長或轉移的作用，而且研究 RRM2 在癌症形成所扮演的可能角色時，是一種非常有用的工具。因此，對於發展具有潛力價 值的檢驗試劑與治療藥物都相當的重要。奈米科技已經廣泛運用於各領域當中，我們也 將製造表面修飾有抗體探針的奈米粒子，來偵測血清中 RRM2 的存在。目前，我們已經 大量表現並且純化人類的 RRM2 蛋白片段，在雞隻產生很好的多株 IgY 抗體，也製造一 些 anti-RRM2 scFv(single chain variable fragment)分子。此外，我們也將製備老鼠的 anti-RRM2 scFv 單株抗體，這些抗體將被用來篩選癌症病人血清中 RRM2 分子，並測試 它們抑制癌症細胞生長或轉移的能力。因此，本研究計劃將完成以下幾件重要目標。 1. 選殖、表現並純化人類的 RRM2 蛋白。 2. 利用老鼠與雞隻製備 anti-RRM2 IgG與 IgY多株抗體。 3. 利用噬菌體展現抗體技術(phage display antibody technology)製備 scFv 單株抗體。 4. 測試這些 anti-RRM2 抗體對於癌症生成的可能抑制效果。 5. 研究這些抗體的抑制癌症功能過程中可能參與的作用機制。 6. 發展一種高度敏感性方法用來檢測癌症病人血清中可能存在的 RRM2蛋白。 7. 製備高親和力的嵌合性(chimeric)或人類化(humanized)的抗體，以避免臨床應用時可 能產生的人類抗外來抗原蛋白的抗體反應。