總計畫：纖維球細胞在肺纖維化角色探討-子計畫二：CXCL12在缺氧誘導肺部纖維化之研究

慢性肺部疾病包括氣喘及源發性肺部纖維化主要的特徵在呼吸道的發炎、呼吸道重組、上皮 細胞下纖維化及缺氧的現象。先前的研究指出缺氧在組織纖維化扮演著重要的角色。在慢性氣喘及 源發性肺部纖維化的病人，CXCR4/CXCL12 (stromal cell-derived factor-1, SDF-1)主軸在肺部纖維化 扮演著重要的角色。CXCL12 為一個非常强的趨化因子，可將纖維球細胞吸引至肺部組織受傷的地 方，貢獻在肺部的纖維化。在具有肺部纖維化的病人中，血漿和肺部中CXCR4+纖維球細胞及 CXCL12 含量有增加的趨勢。再者，使用CXCL12 中和性抗體可以抑制bleomycin 誘導小鼠肺部纖 維化。此外，CXCL12 在誘導癌-聯合纖維母細胞的分化扮演著重要的角色。這些結果提出干擾 CXCL12 網絡或許可以幫助去阻斷肺部的纖維化。有證據顯示p300 在肺部纖維化扮演著重要的角 色。先前的研究指出，在缺氧的刺激下會經由hypoxia-inducible factor-1及c/EBP來誘導CXCL12 的表現，然而p300 是否參與缺氧誘導肺部纖維母細胞CXCL12 的表現則不清楚。最近的研究指出 CXCL12 會增加纖維球細胞的移動，然而，CXCL12 在缺氧誘導肺部纖維母細胞的分化及肺部纖維 化是否扮演著重要的角色則不清楚。我們初步結果顯示，缺氧可誘導肺部纖維母細胞CXCL12 的 釋放、CTGF 及-smooth muscle actin (-SMA,一個肌纖維母細胞標誌)的表現。再者，CXCL12 可 誘導肺部纖維母細胞CTGF 及-SMA 的表現。Anacardic acid (p300 抑制劑)可抑制缺氧誘導肺部纖 維母細胞CXCL12 的釋放。本子計畫中心假說為CXCL12 媒介缺氧誘導纖維母細胞分化及肺部纖 維化。 主題1 (第一年): 研究PI3K/Akt 依賴p300 活化及c/EBP媒介缺氧誘導肺部纖維母細胞CXCL12 的表現 假說1: PI3K/Akt 依賴p300 活化及c/EBP貢獻缺氧誘導CXCL12 的表現 1.1. 使用藥理抑制劑及siRNA 技術測試PI3K、Akt、p300 及c/EBP在缺氧誘導CXCL12 表現所扮 演的角色 1.2. 分析缺氧刺激誘導Akt、p300 及c/EBP磷酸化及活化 1.3. 利用transwell 方法研究PI3K、Akt、p300、c/EBP及CXCL12 在缺氧誘導纖維球細胞及肋膜 間皮細胞趨化所扮演的的角色(與子計畫1 及4 合作) 1.4. 分析缺氧誘導纖維球細胞、肺部纖維母細胞及肋膜間皮細胞之ET-1 及CTGF 的表現(與子計畫 1 及4 合作) 主題2 (第二年): 鑑定CXCL12 參與缺氧誘導肺部纖維母細胞分化變成肌纖維母細胞 假說2: CXCL12 貢獻在缺氧誘導肺部纖維母細胞分化 2.1. 分析在CXCL12 及缺氧誘導肺部纖維母細胞CTGF 及-SMA 的表現 2.2. 研究PI3K/Akt 及其它訊息傳遞路徑在CXCL12 及缺氧誘導肺部纖維母細胞的分化 2.3. 研究miRNA-155 在CXCL12 及缺氧誘導肺部纖維母細胞分化所扮演的角色(與子計畫3 合作) 主題3 (第二年～第三年): 研究CXCL12 在ovalbumin (OVA)及bleomycin 誘導小鼠肺部纖維化的 角色 假說3: CXCL12 煤介OVA 及bleomycin 誘導肺部纖維化 3.1. 確定OVA 及bleomycin 誘導小鼠其氣管肺部灌洗液CXCL12 及纖維球細胞的含量 3.2. 使用藥理抑制劑研究PI3K 及p300 在OVA 及bleomycin 誘導小鼠肺部纖維化模式其肺部 CXCL12、CTGF 及-SMA 表現及纖維球細胞含量的情形 3.3. 測試給予OVA 及bleomycin 之條件CXCL12 剔除小鼠其肺部組纖CTGF、ET-1、miRNA-155、 collagen 及-SMA 表現之情形(與子計畫1 及子計畫3 合作)