具有中和台灣蛇毒蛋白活性的多株和單株IgY抗體的製備與其應用

關鍵詞：抗蛇毒抗體； 免疫球蛋白Y；噬菌體展現技術 目前疾病管制局利用各種減毒過的蛇毒免疫馬匹後，經採血及硫酸銨鹽沈澱精製等步驟，已生產四種抗蛇毒血清產品。但是治療過程中，一旦馬血清蛋白大量進入人體，經常誘發三種免疫副作用，即（1）補體反應；（2）血清病； （3）過敏性休克。另外目前生產抗蛇毒血清所使用馬匹需由國外進口，馬匹單價高，且需要寬闊場地進行飼養管理等工作，且利用馬匹生產相關血清製劑過程需定期抽血，屬於侵入性的性質，在操作過程中對人員潛藏有極大的危險性。而實驗動物保育問題也日益受重視，因此開發符合經濟性、兼具安全性與有效性之新一代高效價抗蛇毒抗體有其重要性與必要性。自從1990年代開始，許多實驗室已經利用減毒的蛇毒來免疫禽類後，而從它們的蛋黃中萃取具有中和蛇毒活性的抗體，這些統稱為免疫球蛋白Y（immunoglobulin Y；IgY）。 另外，分子生物技術的進步，利用單株抗體治療相關疾病已是未來的趨勢，如能成功發展出有效抗蛇毒單株抗體，不僅就能有效解決台灣蛇毒來源與使用大型動物等問題，也可以提高抗體的特異性與並能達成節約成本且高品質產品的目標。目前製備單株抗體的方法主要是以融合瘤方法（hybridoma）與噬菌體展現抗體技術（phage display antibody technology）。因此在本研究中，我們將利用減毒後的蛇毒蛋白分子來注射雞隻，引發其產生特異性的多株抗蛇毒抗體反應，再收集雞蛋蛋黃進一步純化IgY抗體，經確認有良好的抗體反應後，由雞脾臟中抽取RNA，並利用RT-PCR、基因選殖與噬菌體展現技術建構抗體基因庫，在進一步從中篩選出具有中和蛇毒活性的單鏈變異區片段（single chain variable fragment；scFv）抗體。這些抗體的特異性將利用ELISA、Western blotting、immunodisfussion、膠體電泳等技術來驗證。也會於測試測試純化的IgY抗體中和蛇毒LD50的力價以及進行動物實驗測試該抗體是否可以保護老鼠在注射蛇毒蛋白後而造成的死亡。