腎細胞癌機理研究:從RhoA透過微小核酸群調控CD44表現到生物標記及治療之研發(3/3)

腎細胞癌為高度血管性及轉移能力的原生腫瘤，早期診斷有較高存活率。此計晝意旨在揭露腎細胞 從「上皮一間葉細胞轉換路徑；EMT」到癌化的調控機制，特別針對RhoA與CD44蛋白間的關聯性， 尋找RhoA所調控CD44表現及其他顯著變化之微小核酸(microRNAs; miRNAs)，並以RhoA失活時， 高度表達的miRNAs作為早期診斷腎細胞癌生物標記之可能性。我們發現RhoA減少及CD44增加 與腎細胞癌及以芳香烴碳水化合物受體(AhR)促效劑(agonist)(例如：三甲基膽蔥(3MC))處理之人 類腎上皮細胞的細胞轉化和癌化有重要之關聯性，此改變啟動EMT分子活化，增加細胞增生、遷移 及入侵作用等。然而將腎細胞癌中的RhoA重新活化可使上述之現象逆轉回來。第一年，我們將 探究腎癌細胞中RhoA及CD44之反向關係。因腎上皮細胞暴露在3MC後的表現相似於腎癌細胞 的表現型，我們將以此細胞模型來揭露降低RhoA表現及活性之機轉，及降低RhoA後對腎癌相關 分子的影響。初步研究顯示3MC透過組蛋白去乙醯酶第一、三型(HDAC1/3)表現提升及改變 p190RhoGAP/p190RhoGEF表達來降低RhoA活性，類似去乙醯酶抑制劑(SAHA)的作用，辛伐他汀 (simvastatin)藉由降低HDAC1/3及糾正p190RhoGAP/p190RhoGEF表現，可使RhoA功能回復。因 此我們將促使RhoA在細胞中重新表現、活化，或抑制CD44表現來驗證其治療干預作用。第二年， 根據初步證據，我們假設RhoA透過特定微小核酸群(miRNAs)降低CD44表現。以「miRNA微陣 列技術」來尋找透過質體轉殖使腎上皮細胞或腎癌細胞表現活化/不活化態RhoA後，而在表現活化 態RhoA後有顯著增加的miRNAs，再使用「即時定量聚合酶連鎖反應技術」分析此miRNAs與CD44 在病人檢體中之關聯性。另外，將利用腎癌細胞株殖入免疫缺乏小鼠皮下及其腎皮質以建立RCC 實驗動物模型。第三年將尋找miRNAs在細胞表現活化態RhoA時減少，但在表現不活化態RhoA 後有顯著增加的miRNAs，將其發展成一種早期非侵入性腎細胞癌檢驗(如病人的尿液)之生物標記。 其標的基因及功能將在整合miRNA及gene微陣列後加以闡釋。此外，利用腎細胞癌的病人檢體進 行「免疫組織化學染色」及「戴奥辛反應單元驅動冷光測試」來檢驗降低RhoA/CD44之比率與增加 AhR agonist暴露與腎癌嚴重度之關聯性。最終將使用人類腎細胞癌初代細胞移植所建立的腎癌小 鼠動物模式來檢驗RhoA活化劑以治療腎細胞癌之功效。我們企圖闡明「RhoA、CD44的反向關 係」、「暴露在AhR agonists」對腎細胞癌形成之調控機制，並鑑別一群隨著RhoA活性改變時而 變動之miRNAs，將其發展為早期檢驗腎癌之生物標記物。預期未來將有預防或治療腎細胞癌之有 效方法的出現。