山藥儲藏性蛋白質, dioscorin, 不同酵素水解物及其分離peptides之免疫調節活性研究

本實驗室過去以純化之未水解山藥儲藏性蛋白質，dioscorin，進行細胞實驗發現其具有促進細胞吞噬作用與細胞激素分泌之免疫調節活性(Food Chem. Toxicology, 2007, 45, 2312-2318)；純化之dioscorin於餵食 BALB/c小鼠 21天的試驗當中，亦發現此 dioscorin經過老鼠體內酵素分解後依然存在免疫調節活性，包括促進吞噬與自然殺手細胞活性，分泌細胞激素等(J. Agric. Food Chem., 2009, 57, 9274-9279)。由已發表之結果顯示，dioscorin經過動物體內之酵素水解後，其特定或某些胜肽片段仍具有免疫調節之活性。我們於預備試驗中發現（結果置於後），蛋白酶水解物可以促進RAW264.7細胞株產生NO，這樣的初步結果可以呼應本研究室2007(Food Chem. Toxicology, 2007, 45, 2312-2318)與2009(J. Agric. Food Chem., 2009, 57, 9274-9279)所發表的研究論文，有繼續深入研究之價值。此二年期計畫執行重點如下，第一年計畫，將以不同種類之蛋白質水解酵素對 dioscorin進行水解，以 RAW 264.7細胞作為篩選平台進行活性導向篩選，分離出具免疫調節活性之胜肽，並定出其序列，以供第二年計畫進行合成與試驗。水解物所含胜肽同時進行抗氧化與細胞試驗，檢視不同水解產物之活性作用。第二年計畫，將對活性胜肽以本實驗室已經具有合成經驗之固相胜肽合成方式進行合成，隨後以細胞與動物試驗平台進行較完整之活性分析。細胞試驗方面，除了 RAW 264.7細胞株之平台外，將以初代細胞進行測試，特別是周邊血液單核球細胞，以模擬人體之狀態；動物實驗方面，則以活性胜肽對 BALB/c進行餵食，對其周邊血球分佈、脾臟淋巴球增生、血球免疫活性與細胞激素分泌等進行分析，並觀察腸道淋巴結之變化，以對其免疫活性進行較完整之評估。