以蛋白質體學探討miR-17-5P 在口腔癌細胞株OC3 之放射生物角色研究

嚼檳榔與台灣地區的口腔癌發生率有很高度的相關性。放射線治療是口腔癌治療的 方式之ㄧ。miR-17-92 polycistronic miRNA 是第一群被發現與腫瘤細胞抗凋亡能力有關 的mirRNA。mirRNA 通常是調控一系列的基因。我們最近以一株建立自長期嚼檳榔而 無抽菸患者之口腔癌squamous 細胞株OC3，探討miR-17-92 polycistronic miRNA 在接 受放射線作用之OC3 的表現與角色。研究結果顯示miR-17-92 polycistronic miRNA 中的 miR-17-5p 會在接受放射線作用之OC3 大量表現並抑制其下游p21 蛋白質的表現，由於 p21 在接受放射線作用之OC3 的細胞凋亡扮演了重要的角色，此抑制作用，反而變成了 增加OC3 細胞對放射線治療產生抗性的分子機制，我們分別在體外細胞與體內腫瘤模 式驗證了這項結論。研究成果已經發表於Strahlenther Onkol. 2013 Aug;189(8):675-83。 在本二年期計劃中，我們主要將延續此研究模型，更完整探討miR-17-5p 在放射線 處理之口腔癌細胞株OC3 之生物角色。我們的分年目標為: 第一年:以蛋白質體學分析篩選出miR-17-5p 調控之特殊分子蛋白。主要之研究策略與 方法為: 1.運用蛋白質體學分析比較在正常與miR-17-5p 過度表現之OC3 細胞株的蛋白質表現情 況。 2.運用GC-MASS 鑑定約200 個在正常與miR-17-5p 過度表現之OC3 細胞株中，具差異 性的蛋白質身份。 3.運用具差異性蛋白質的生物資訊學資料進行系統生物學分析。 4.以western blot 驗證由蛋白質體學分析所得的10%蛋白質之表現。 第二年以細胞分子生物學與動物試驗針對第一年篩選出的分子進行功能測試，主要將鎖 定與放射治療相關的抗凋亡、血管新生與發炎反應分子。主要之研究策略與方法為: 1.以活體動物腫瘤放射線治療模式，以免疫組織染色探討腫瘤組織中，由蛋白質體學分 析所篩選出的特定分子蛋白之表現。 2.以siRNA 方法抑制特殊蛋白之表現，進一步以細胞凋亡檢測方法包括Annexin-V staining、細胞週期分析、Hochese based aopototic bodies staining、DNA laddering assay 等，驗證miR-17-5p 所調控之抗凋亡分子的生物角色。 3.以siRNA 方法抑制特殊蛋白之表現，進一步以血管新生檢測方法包括 permeability assay、cell growth assay、 tube formation assay、cell migration assay 等，驗證miR-17-5p 所調控之血管新生分子對血管內皮細胞的生物角色。 4.以siRNA 方法抑制特殊蛋白之表現，進一步以細胞趨化能力測試方法，驗證miR-17-5p 所調控之細胞激素對免疫細胞的生物角色。 5.運用商業化之口腔癌病理組織切片，以免疫組織染色偵測腫瘤組織中miR-17-5p 所調 控之特殊蛋白質的表現，探討miR-17-5p 在口腔癌之臨床意義。 我們預期本研究結果將能由基礎研究到臨床意義，完整提供miR-17-5p 在口腔癌之 放射線治療的生物角色。