雌激素經由脊髓kalirin/PSD-95-NR2B相關之NR2B磷酸化影響大白鼠結腸-尿道交互作(2/3)

流行病學的調查顯示，腸燥症(irritatable bowel syndrome: IBS)的患者有較高的下泌尿道功能障礙所導至的慢性骨盆腔疼痛(chronic pelvic pain; CPP)‧在此一計劃中，將研究一種被認為導致骨盆腔內腸道與生殖泌尿道同時發生疼痛症狀的跨臟器敏感現象：結腸-尿道器交互作用(colon-urethra crosstalk; CUC)。 在第一年的計劃中，將釐清脊髓中kalirin (一種被認為在神經塑性中伴演重要角色的Rho-guanine nucleotide exchange factor)對於CUC的貢獻‧同時討論 post-synaptic density-95 (PSD-95) 與 N-methyl-D-aspartate (NMDAR) NR2B 次單位交互作用所導致NR2B磷酸化作為kalirin 下游訊息以引發CUC的可能性‧因此，我們將記錄並比較在活體大鼠中，電刺激誘發尿道肌電活動對於結腸內灌注芥子油(mustard oil; MO)或玉米油(corn oil; CO)的反應‧同時脊髓中 kalirin, PSD-95, total NR2B (tRN2B),以及 phosphorylated NR2B (pNR2B)的表現量將以西方點墨法(Western blot)對腰薦部背角檢體(L6-S2;在MO或CO 灌注後120 min時摘取;此時MO所促進的尿道反射呈現穩定)加以分析‧kalirin, PSD-95, 以及 tRN2B 的交互作用則以共同沉降法(coprecipitation)及免疫螢光化學法(immunohistochemical)加分析‧ 由於雌激素已被証實可以促進CUC, 在第二年的計劃中，將探討雌激素調控CUC是透過脊髓中kalirin/PSD-95-NR2B/pNR2B訊息達成的可能性‧在此，我們將評估在 (estrogen supplement; estradiol, 50 ug/kg, s.c. daily for at least 20 days)與否促進CUC的反應‧此外, 脊髓中 kalirin, PSD-95, tNR2B, 或 pNR2B 的表現量、交互作用、及表現位址則將以西方點墨法、共同沉降法及免疫螢光化學法加分析‧同時，ERα及ERβ作用劑也將投予至卵巢切除大鼠雌; ERα及ERβ拮抗劑則被注射至雌激素補充之卵巢切除鼠，以釐清雌激素接受器療在此一促進作用的角色‧ 另外，由於子宮內膜異位(endometriosis)的臨床症狀一般認為是由於體內雌激素濃度異常的提升所導致‧由於目前已有研究建立了子宮內膜異位的動物模式，我們將在第三年的計劃中重建此一動物模式‧在檢測血漿中雌激素濃度之後，評估CUC在子宮內膜異位及偽手術動物的差異‧此外, 兩組動物脊髓中 kalirin, PSD-95, tNR2B, 或 pNR2B 的表現量、交互作用、及表現位址則將以西方點墨法、共同沉降法及免疫螢光化學法加分析比較‧以釐清子宮內膜異位所引發的雌激素濃度增高是否會透過kalirin/PSD-95-NR2B/pNR2B訊息促進CUC‧相同地， ERα及ERβ拮抗劑則被注射至子宮內膜異位鼠，以釐清雌激素接受器療在子宮內膜異位促進CUC作用的角色‧透過此一計劃我們希望能夠提供數據証明脊髓中 kalirin 不僅在可能在導致燥腸症併發慢性骨盆腔疼痛的的神經塑性中扮演著重要的角色，同時也是子宮內膜異位加劇骨盆腔疼痛症狀的關鍵分子. 此一研究的成果將可以作為治療由跨臟器所引發的骨盆腔生殖泌尿道疼痛的藥理治療研發茦略