開發以尼古丁乙醯膽鹼受體為標靶應用於乳癌之新穎治療藥物

本實驗室過去利用Förster resonance energy transfer(FRET)技術證實alpha 9-nAChR和HER-2可形成複合體。因此，我們認為研究alpha 9-nAChR和HER-2複合體形成的機制，有助於探討乳癌病人alpha 9-nAChR如何改變HER-2抗原性，導致病人對Trastuzumab(Herceptin®)產生抗藥性之分子機制。在9-nAChR藥物開發中我們訂定三個階段確認乳癌治療的應用。第一步-過去研究中我們發現抑制alpha 9-nAChR表現(siRNA)可有效抑制乳癌腫瘤的生長，第二步-本計畫第一年我們利用RgIA (alpha 9-nAChR小分子蛋白質拮抗劑)證實調控alpha 9-nAChR活性可明顯減緩乳癌的生長。第三步-經由確認活體上的療效後我們希望能藉由發展人源化alpha 9-nAChR抗體期能對乳癌本體或是具有Herceptin抗藥性乳癌提供突破性的治療策略。本計畫三年期目標如下: 第一年: 乳癌病變之alpha 9-nAChR基因表現與Herceptin治療抗藥性研究(已完成) 目標一:alpha 9-nAChR表現與Herceptin抗藥性探討 目標二:RgIA如何抑制alpha 9-nAChR表現與乳癌幹細胞生成 第二年: 動物模式探討alpha 9-nAChR抗體抗乳癌能力與抗藥性分子機制研究(本年度) 目標三:alpha 9-nAChR抑癌抗體建構與人源化開發 1.利用不同alpha 9-nAChR抗體群找出抗乳癌效果明顯之專一性單株抗體。 2.建構alpha 9-nAChR抗體和乳癌細胞間結合能力之資訊與抑癌效用之關聯性。 3.利用選擇性優化與人源化過程加以改造alpha 9-nAChR專一性單株抗體以免疫減少排斥作用。 4.利用高度複雜性的人類抗體基因庫 (human antibody library)做人源特異性抗體的篩選。 5.完成臨床前14與28天動物毒性及療效評估平台，例如基因毒性，急毒性，亞急毒性。 第三年: 細胞模式探討alpha 9-nAChR基因表現與乳癌抗藥性分子機制研究 目標四:alpha 9-nAChR抗體如何影響HER-2複合體形成及其抗癌與抗藥性機制探討 1.建立活體螢火蟲冷光酵素蛋白活體腫瘤模式與三維活體分子影像分析系統作為alpha 9-nAChR與HER-2複合體與腫瘤生長分析平台。 2.觀察(1).抗癌藥物(如Herceptin)、(2).RgIA、(3).alpha 9-nAChR專一性抗體如何在活細胞內影響alpha 9-nAChR與HER-2複合體形成而達到減緩乳癌腫瘤生長作用。 3.上述藥物如何增強Herceptin抗乳癌能力與解決Herceptin抗藥性問題。 4.利用單細胞雷射擷取技術 Single Cell Laser Capture Microdissection (SC-LCM)技術，擷取乳房正常細胞、原位癌與轉移細胞分析alpha 9-nAChR 表現或與Herceptin抗藥性相關性。 目標五: 活細胞模式觀察alpha 9-nAChR/HER-2複合體形成與腫瘤抗藥性機制探討。