利用伴護分子/水晶蛋白基因/蛋白自噬三種方式進行聚合微膠體眼藥水白內障之評估

維持眼睛水晶體透明度必需使水晶體蛋白能夠同時維持其自然態四級結構與其可溶之特性。因此利用助疊小分子/或水晶體蛋白基因在適合載體在體外內安定性、以及在水晶體組織分佈情形,應是目前發展眼藥水治療白內障載體之重要方向。在先前實驗中我們發現在二個小時內,利用聚合微膠體包覆二個螢光分子或具螢光之基因複合體下均能夠與聚合微膠體安定停留於角膜組織；同時在初步數據顯示下,此聚合微膠體載體可以更深入至水晶體的囊、皮層與核心分佈部位。 因此本計畫是利用螢光共振能量轉移(FRET)設計,分析觀察助疊小分子lanosterol/或水晶蛋白基因或蛋白自噬治療基因在聚合微膠體傳遞下,觀察在不同層水晶體組織層中與內部彼此之間相關距離與排列,進而以了解其穿透之特性機制。希望能找到最佳化形成聚合複合體分子藥物動力資訊,並且觀察在體內外安定性特性,並及時完整進行白內障水晶體動物模式投與帶有水晶蛋白基因在聚合微膠體、細胞/組織之分佈與治療評估。首先,第一年度主要目標為配合螢光化的聚合載體 (FITC-PM)與lanostserol或基因之rhodamine螢光分子合成,觀察體外螢光共振能量轉移,並評估其及時包覆與其釋放/安定性之評估。第二年度則進行螢光化lanostserol或水晶蛋白基因與聚合載體之螢光共振能量轉移進入水晶體組織之及時觀察,並在添加不同穿透抑制劑(caveolae-, clathrin-吞噬依存或能量依存)下，評估基因與聚合載體彼此受其影響之穿透距離與排列分佈。而第三年度則進行眼藥水的白內障動物模式給予方式下,及時觀察水晶體組織之螢光化lanostserol或水晶蛋白基因/FITC-聚合微膠體之螢光共振能量轉移觀察下,能進行白內障水晶體投與療效評估。利用多功能顯像系統、及時共軛焦顯微鏡、西方轉漬法、免疫組織切片,觀察螢光化lanostserol或水晶蛋白基因與聚合微膠體在活體水晶體組織與細胞動力/藥效分佈；並計算其穿透速率以了解彼此間相關性。