類神經細胞在三維纖維狀基質上的細胞行為及其基因分析

降解性生醫材構成的基質環境是否利於細胞生長並影響各種細胞行為，進而改變細 胞的基因表現產生長遠的影響是組織工程中重要的設計因素；因此，本研究以發展一個 神經再生用的基質為模式，調控訊息因子及支架設計以瞭解細胞行為及基因所受的影響， 試圖建立一個實驗模式作為發展組織工程之用。實驗以兩年時間完成包括(1)薄膜製備及 機能性生物高分子的被覆、(2)薄膜物性測試與鑑別、(3)薄膜的毒性試驗及活體外試驗、 (4)薄膜上細胞基因表現分析及免疫螢光染色。首先是以不同兩種生物高分子(PLLA、 PBSA)為溶質，以溶劑(DCM、DMF)配製不同比例濃度之溶液，再以電紡製備粗細差異 近十倍之纖維狀薄膜，被覆第一型膠原蛋白或聚肤胺酸後，將所得之薄膜進行膜厚度、 接觸角、孔洞率以及孔洞大小等物性檢測，並以立體螢光顯微鏡及掃瞄式電子顯微鏡觀 察其型態。接著以纖維母細胞進行毒性測試，再以PC12 細胞培養於纖維薄膜上，加入 神經成長因子後以檢測細胞活性試劑:WST-1 assay 觀察細胞貼附、增生數量之情形，再 以電穿孔轉殖將螢光質體轉殖進入PC12 中以觀察神經突生長的情形。之後進行PC12 細胞的Gap 43、Map 2、Bcl-xL、 Bcl-2、Bax 及Fas 等基因的分析。所得結果可提供一 個可用的神經誘導的細胞模式以供下階段人工週邊神經管發展之最佳解。