子宮內膜異位症免疫診斷試劑開發計畫

子宮內膜異位症(endometriosis)為子宮內膜細胞在子宮以外的部位附著與增生之病症，是造成生育年齡婦女不孕的主要原因之一。目前臨床上仍使用高侵入性的腹腔鏡方式進行診斷。本研究擬設計及開發子宮內膜異位症血清診斷套組，提供子宮內膜異位症患者一個低侵入性且方便快速之診斷試劑。以期早期診斷早期治療，降低不孕症的發生。 本計畫先期與中央研究院生化所抗體中心及動物中心合作已成功研製出二支可辨認與子宮內膜異位症(endometriosis)高度相關之血清蛋白標記(serum marker)不同抗原決定位置之抗體株，並於臺北醫學大學附設醫院自2008.2.1 -2008.12.15共收集人類血清201例(對照組(23例)、懷孕組(12例)、子宮內膜異位症組(113例)、已接受GnRH analog治療之子宮內膜異位症組(53例))，作為自製單多株抗體及未來製作之診斷試劑之專一性及敏感性評估測試。而因2008-2009年第一期轉譯醫學研究計畫有更多新的研究成果，已由生技製藥類國家型科技計畫研發成果產業化橋接辦公室協助申請另一以已製備之單株抗體為內容深起美國專利新案，並將申請PCT 註冊以利後續申請多國之世界專利，以使本研究之全球專利布局更臻完善。此外，本研究因具備專利智財保護以及本研究其衍生之診斷試劑相關材料製備驅近完成，具創新及市場價值，因此已有國內外多家廠商表示意願以共同開發方式進行成果商業化。目前正在評估當中，可望於2011年順利完成部分發明技轉。值此關鍵時刻，本計劃擬延續先前之研究，以期全球第一支子宮內膜異位症血清診斷試劑能於本期之轉譯醫學計劃執行中開發完成。此研究具備轉譯醫學研究之完整資歷，自基礎至臨床研究均由同一團隊合作多年完成，由臨床醫師，基礎研究員及具備豐富資歷之專門技術人員組成，並且已培養及訓練多位研究人才。本研究於前一年計劃中發現針對子宮內膜異位症病人血清中之A1AT製造出之抗體主要可辨認二種不同分子量的A1AT isoform且經質譜儀確認兩種不同分子量的分子均為A1AT。我們已利用人類血清中之α1-antitrypsin (A1AT)為抗原製造抗體。並發現α1-antitrypsin於子宮內膜異位症患者血清中所表現之主要片段為58kDa與72kDa蛋白片段並以質譜儀確認兩者均為A1AT。根據人類A1AT之基因序列推得該蛋白質分子量為47 kDa,本研究證實58kDa與72kDa A1AT蛋白片段含基因轉譯後修飾之醣鏈，經酵素分析發現該主要片段至少含一條N-醣鏈，其中並包含有至少一個唾液酸路易斯寡醣分子(sialyl Lewis X)。目前本研究團隊已進行製備三支抗體，其中兩支免疫鼠之血清中已確認含有可辨認抗原之抗體IgG，對58kDa與72kDa A1AT蛋白片段分別有不同之專一性，即將取出該免疫鼠脾臟進一步製造融合瘤及挑選抗體株，另一支為以脾臟免疫方式以小分子半抗原至倍之抗體可辨識唾液酸路易斯寡醣分子。我們亦已用現階段所獲得之自製A1AT抗體血清與市售A1AT單株抗體與子宮內膜異位症患者血清反應比較，在西方墨點法中發現，市售A1AT單株抗體主要辨認58kDa A1AT蛋白片段，而本團隊自製之A1AT抗體血清可同時辨認58kDa與72kDa A1AT蛋白片段，點狀墨點法結果顯示自製之A1AT抗體血清在1:100000的稀釋條件下，仍可辨識子宮內膜異位症患者血清中所表現之A1AT，並與未患子宮內膜異位症婦女血清反應比較仍有顯著差異。而市售A1AT單株抗體在1:50000的稀釋條件下，已無法辨識子宮內膜異位症患者血清中所表現之A1AT，並與未患子宮內膜異位症婦女血清反應比較無差異。本研究顯示，本團隊未來製成之A1AT單株抗體將可望獲得兩種以上可分別對與子宮內膜異位症高度相關之A1AT蛋白片段具高度專一性及敏感度(200pg以下)之單株抗體株。此外，配合另一支可辨識唾液酸路易斯寡醣分子之抗體作交叉比對，將可望在未來利用自製單株抗體於子宮內膜異位症血清免疫診斷試劑中可提供良好之專一性及敏感度。此研究亦計畫將設計子宮內膜異位症血清診斷試劑原型並藉由收集到的血清檢體評估其專一性及敏感性，並希望與廠商能共同開發出全球第一支子宮內膜異位症血清診斷試劑，減少不孕症的發生，降低大量的醫療及社會成本之負擔，以及培養生技醫材產業專業人才及以提升國內生技產業經濟規模為目標。